miR-145-5p通过靶向RAD18调控结直肠癌细胞的增殖与NK细胞的细胞毒作用

摘要：

目的:探索RAD18影响结直肠癌细胞增殖及调节NK细胞对结直肠细胞的杀伤作用及其可能的机制.方法:采用生物信息学技术分析结直肠癌组织中RAD18和miR-145-5p的表达及两者之间的调控关系、分析RAD18富集通路.采用qPCR法验证RAD18和miR-145-5p在结直肠癌细胞中的表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-145-5p与RAD18的调控关系.按转染物的不同将SW480、HCT-15细胞分为将si-RAD18组、si-NC组,另向SW480细胞分别转染inhibitor-NC+si-NC、miR-145-5p inhibitor+si-NC或miR-145-5p inhibitor+si-RAD18,采用CCK-8法、克隆形成实验分别检测敲降miR-145-5p和/或RAD18对细胞增殖、克隆形成的影响;将各组细胞分别与经IL-2激活的NK92细胞共培养,采用乳酸脱氢酶释放法、ELISA和免疫荧光染色法分别检测NK细胞的细胞毒性、细胞因子分泌及细胞表面穿孔素和颗粒酶B表达的影响.结果:RAD18在结直肠癌组织和细胞中呈高表达(均P<0.01).敲降RAD18可以抑制结直肠癌细胞增殖能力(P<0.05)和促进NK细胞活力、细胞毒性、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF分泌及穿孔素和颗粒酶B的表达(均P<0.05).双荧光素酶报告实验验证了RAD18-3'UTR与miR-145-5p的结合关系,miR-145-5p在结直肠癌组织和细胞中低表达(P<0.05或P<0.01).miR-145-5p可以靶向下调RAD18的表达(P<0.05),过表达RAD18可以逆转miR-145-5p过表达对NK细胞杀伤效应的促进作用(均P<0.05).结论:miR-145-5p可靶向下调RAD18的表达,miR-145-5p/RAD18轴能够影响结直肠癌细胞的增殖和NK细胞对其的细胞毒作用.

关键词：结直肠癌、miR-145-5p、RAD18、NK细胞、SW480细胞、HCT-15细胞

所属期刊栏目：30

分类号：R735.3;R730.54(肿瘤学)

资助基金：河北省医学科学研究课题No.20211322

在线出版日期：2023-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：681-688