靶向抗PD-1/CD19双特异性抗体的表达与活性鉴定

摘要：

目的:重组表达和纯化靶向抗PD-1/CD19双特异性抗体(bispecific antibody, BsAb)并验证其活性.方法:以pCAR1为载体,利用分子克隆技术构建抗PD-1/CD19 BsAb真核表达载体,通过PEI试剂转染哺乳动物细胞株CHO-S瞬时表达抗体.利用亲和层析法对BsAb进行纯化,用SDS-PAGE和WB实验进行BsAb蛋白鉴定.用荧光素酶报告基因检测BsAb对PD-1/PD-L1的体外阻断活性,乳酸脱氢酶细胞毒实验检测BsAb依赖的PBMC介导细胞毒性(ADCC)活性.结果:成功构建双质粒真核表达载体pCAR 1-19X3,BsAb在CHO-S细胞中成功表达,命名为pCAR 1-19X3-TY.pCAR1-19X3-TY在体外能够有效地阻断PD-1与其配体PD-L1的结合,其量效曲线的EC50为0.306 μg/ml.ADCC结果显示,pCAR 1-19X3-TY能介导PBMC对Raji细胞产生细胞毒性,曲线呈现直线上升的趋势;当效靶比为50∶1时,pCAR1-19X3-TY的杀伤率为(38.9±0.3)％,与阳性处理组的杀伤率(46.7±4.9)％的差异比较无统计学意义(P＞0.05),明显高于阴性对照组(1.2±0.1)％杀伤率(P＜0.05).结论:重组表达的靶向抗PD-1/CD19BsAb能有效阻断PD-1和PD-L1的结合、激活PBMC介导的Raji细胞毒性作用,具有开发用于治疗B细胞恶性肿瘤的潜力.

关键词：双特异性抗体;PD-1;CD19;PD-1/PD-L1相互作用;ADCC活性;肿瘤;免疫治疗

所属期刊栏目：28

分类号：R730.51;R733.71(肿瘤学)

资助基金：天津市重点研发计划科技支撑重点项目No.18YFZC-SY01340

在线出版日期：2021-06-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：359-364