PD-S15融合蛋白体外特异性靶向PD-1分子并快速扩增NK/T细胞

摘要：

目的:探讨anti-PD-1 (scFv) /IL-15/IL-15Rα-sushi (简称PD-S15) 融合蛋白体外特异性结合PD-1的能力及其对NK/T细胞增殖能力的影响.方法:化学合成人anti-PD-1 (scFv) 基因和人IL-15/IL-15Rα-sushi融合基因, 经过酶切连接构建重组表达质粒pUC57-PD-S15, 用LipofectamineTM2000瞬时转染HEK293T细胞, 收获细胞培养液上清, 用Wb法检测细胞培养液上清中PDS15融合蛋白的表达;用不同配比的PD-S15/X-VIVOTM15培养液对PBMC和TIL分别诱导培养后, 用流式细胞术检测PD-S15融合蛋白体外特异性结合PD-1的能力和对PBMC增殖及CD3+CD8+、CD3+CD4+、CD3-CD56+各细胞亚群比例的影响;用细胞计数法检测PD-S15融合蛋白对TIL增殖能力的影响.结果:pUC57-PD-S15表达质粒经双酶切和测序验证构建成功并成功转染HEK293T细胞, 目标蛋白相对分子质量大约为55 000, 符合预期.PD-S15融合蛋白体外具有PD-1特异性结合能力 (P<0.05) 及NK/T细胞活化增殖能力 (P<0.05);与经典TIL培养方案相比, PD-S15培养方案体外活化扩增T细胞的能力更强 (P<0.01) .结论:PD-S15融合蛋白体外能够特异性靶向PD-1分子并快速扩增NK/T细胞, 为后续从肿瘤组织内或外周血中选择性扩增CD8+PD-1+抗原特异性T细胞奠定了基础.

关键词：程序性死亡受体1、白细胞介素-15/白细胞介素-15受体、PD-S15融合蛋白、过继细胞治疗、抗原特异性T细胞

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分类号：R392.33

资助基金：国家自然科学基金资助项目81502468;河南省医学科技攻关计划项目201701030;河南省自然科学基金项目182300410344;河南省科技攻关计划项目162300410095

在线出版日期：2019-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：389-395