SHIP1基因过表达非小细胞肺癌细胞系的建立及其对细胞增殖能力的影响

摘要：

目的:观察SHIP1对NSCLC细胞增殖的影响.方法:由NCBI Gene数据库查询获得人SHIP1基因CDS区,插至载体pTSB-CMV-MCS-SBP-3F1ag-EGFP,构建SHIP1真核过表达质粒;进一步利用其构建SHIP1过表达慢病毒.用该慢病毒感染A549、SPCA-1和PC-9细胞株,获得SHIP1急定过表达NSCLC细胞系.Western blotting和qRT-PCR分别从蛋白水平和mRNA水平检测SHIP1的表达变化.采用MTT法和克隆形成实验检测过表达SHIP1的PC-9细胞增殖活力和克隆形成能力.Western blot-ting检测AP-1蛋白复合体各组分的表达.结果:SHIP1真核过表达质粒经测序证实构建成功.稳定过表达SHIP1的A549、S-PCA-1和PC-9细胞,在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光.与阴性对照组比较,细胞中SHIP1在mRNA(P＜0.01)及蛋白水平均明显升高.在PC-9细胞中,过表达SHIP1使细胞增殖、克隆形成能力降低(均P＜0.01),p-c-Jun、FosB等表达降低.结论:成功构建了稳定过表达SHIP1的A549、SPCA-1和PC-9细胞模型;过表达SHIP1可通过抑制AP-1家族蛋白抑制NSCLC细胞增殖能力.

关键词：多磷酸肌醇-5-磷酸酶、非小细胞肺癌、基因重组、稳定过表达、细胞增殖

所属期刊栏目：25

分类号：R734.2;R730.54(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目U1502222,81702295;云南省卫生科技计划资助项目2017NS177,2016NS113;云南省科技计划资助项目2014FB064;中国博士后科学基金资助项目2017M613008

在线出版日期：2018-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：680-686