10.3872/j.issn.1007-385X.2017.01.012
P53通过促进miR-145的表达抑制肺腺癌A549细胞的干细胞特性
目的:探讨P53抑制肺腺癌A549细胞干细胞特性及其机制.方法:收集2014年3月至2015年12月解放军第85医院胸外科手术切除的30例非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)患者癌组织及癌旁组织,采用Real-time PCR检测NSCLC组织和癌旁组织中miR-145的表达.构建人P53基因的真核表达载体(peDNA3.1-P53)和突变载体[pcDNA3.1-P53R273H(CGT-CAT)],设计靶向P53基因的siRNA,分别转染A549细胞;细胞分为对照转染组(Vector或NC-siRNA)和实验组(Flag-P53或P53-siRNA);Western blotting检测P53蛋白过表达和干扰效率,Real-time PCR检测OCT4和miR-145的表达,荧光双报告基因和Western blotting技术检测证实A549细胞中干细胞多能性调节基因(OCT4)为miR-145的靶标分子.结果:NSCLC组织中miR-145的表达水平明显低于癌旁组织[(2.31 ±0.13)vs(3.51 ±0.27),P<0.01];P53明显促进A549细胞中miR-145的表达[(1.84±0.14)vs(1.00 ±0.00),P<0.01];miR-145 mimics显著抑制A549细胞中pGL3-OCT4-3’-UTR活性(P<0.01)和OCT4蛋白表达水平(P<0.05),而转染miR-145抑制剂可进一步增加OCT4表达水平,且逆转P53对A549细胞的干细胞特性的抑制作用.结论:P53通过促进miR-145表达下调OCT4表达,进而明显抑制A549细胞的干细胞特性,该结果为肺腺癌的临床诊断和治疗提供了新途径.
P53、miR-145、干细胞多能性调节基因(OCT4)、非小细胞肺癌、肺腺癌A549细胞、干细胞特性
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R730.54;R734.2(肿瘤学)
2017-03-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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