10.3872/j.issn.1007-385X.2016.03.008
沉默ERK增强A375黑素瘤细胞对TRAIL诱导细胞凋亡的敏感性
目的:探讨直接抑制细胞外信号调节激酶(extra cellular signal-regulated kinase,ERK)表达后,对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对黑素瘤细胞杀伤作用的影响及其作用机制.方法:用携带ERK特异或对照shRNA的慢病毒感染A375黑素瘤细胞,48 h后加入终浓度为100 μg/ml基因重组TRAIL蛋白继续培养6h,收获细胞,碘化丙啶染色,用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和TRAIL受体的表达;Western blotting检测相关蛋白的表达水平.结果:亚型特异的ERK shRNA分别沉默ERK1或ERK2,导致A375细胞出现G1期阻滞(对照shRNA组的G1期细胞比例为71%,ERK1、ERK2、ERK1 +2 shRNA组分别增加到85%、90%和81%,P<0.01);S期细胞从对照组的11%减少到2%左右(P<0.001)、G2/M期细胞也从对照组的17%减少到3%(P<0.01).细胞周期改变伴有P21、P27蛋白上调和Cyclin D1蛋白降低,但未见明显的细胞凋亡.经对照shRNA和TRAIL处理的细胞,仅有15%的凋亡率,而ERK shRNA和TRAIL联合处理则使凋亡率达到40% ~60% (P<0.01).抑制ERK蛋白表达能显著上调细胞表面TRAIL受体DR4的表达(从对照组32%增加到75%~80%,P<0.01),但DR5变化不明显.ERK抑制还明显降低A375细胞的葡萄糖转运受体1(Glut 1)和己糖激酶Ⅱ(HK-Ⅱ)的蛋白表达水平.结论:直接抑制ERK不仅可以抑制肿瘤细胞周期的进展,而且可以增强TRAIL对A375黑素瘤细胞的杀伤作用,其机制与上调细胞表面DR4的表达和干扰肿瘤细胞糖代谢有关.
黑素瘤、A375细胞、细胞外信号调节激酶、TRAIL、细胞凋亡、糖代谢
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R739.5;R730.5(肿瘤学)
国家自然科学基金资助项目No.81241148.Project supported by National Natural Science Foundation of ChinaNo.81241148
2016-07-12(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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