目的:探讨舒尼替尼诱导人肝癌HepG2细胞表达的自然杀伤细胞2族成员D配体(natural killer group 2 member D ligands,NKG2DLs)与核因子kappa B (nuclear factor B kappa,NF-κB)信号通路之间的相互作用.方法:常规体外培养HepG2细胞,利用实时荧光定量PCR检测1μmol/L舒尼替尼处理HepG2细胞24 h前后NF-κB基因家族成员mRNA的表达情况,利用计算机辅助设计并合成NF-κB1、NF-κB2和RelB siRNA引物,通过脂质体法将目的基因siRNA转染于HepG2细胞,荧光显微镜观察转染情况,实时荧光定量PCR检测干扰效率,Western blotting检测siRNA转染前后HeG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和RelB蛋白表达,流式细胞术检测siRNA前后HepG2细胞NKG2DLs表达率.结果:实时荧光定量PCR结果显示,舒尼替尼处理HepG2细胞后,NF-κB1、NF-κB2和ReIB mRNA表达水平升高,主要以NF-κB2 mRNA和RelB mRNA升高为主.荧光显微镜观测siRNA转染后HepG2细胞红色荧光表达率约为60%,干扰效率达95%以上.siRNA转染后HepG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和Re1B蛋白表达水平明显下降,siRNA转染+药物组NKG2DLs表达率明显低于药物处理组(P<0.05).结论:首次揭示了舒尼替尼通过NF-κB旁路途径诱导肿瘤细胞表达NKG2DLs.
舒尼替尼、肝细胞癌、干扰RNA、HepG2细胞、NF-κB家族成员
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R735.7;R730.54(肿瘤学)
国家自然科学青年基金资助项目No.81302372,81300431;南方医科大学珠江医院优秀中青年人才项目资助No.201207008 .Project supported by the National Natural Science Foundation for Young Scientists of China No.81302372,81300431,and the Excellent Middle and Yong Aged Experts Project of Zhujiang Hospital Southern Medical UniversityNo.201207008