腺病毒介导的双荧光素酶报告系统的构建及其应用

摘要：

目的:构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统,并利用其筛选一种广谱高活性启动子.方法:将待检测启动子控制的萤火虫荧光素酶(Fluc)基因表达框插入腺病毒E1区,CMV启动子控制的海肾荧光素酶(Rluc)基因表达框插入E3区作为内参,构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统.检测不同病毒感染量条件下测得的启动子活性数据差异、组内差异,难转染细胞内的转染情况,分析该系统的操作简便性、稳定可靠性.应用该系统检测常用启动子CAG、CASI及新启动子CCAU在一系列细胞内的活性,从中筛选出一种广谱高活性启动子.结果:成功构建了腺病毒介导的双荧光素酶报告系统;不同MOI值下测得的各启动子相对活性值无显著差异(P＞0.05);在所实验的细胞内均能有效且准确地测定各启动子的活性,且复孔间方差小;CCAU在所实验的9株细胞中的表达活性显著(P＜0.05)或极显著地(P＜0.01)高于CASI以及CAG的表达活性.结论:构建获得的腺病毒介导双荧光素酶报告系统操作简便、稳定可靠、通用性强,可作为启动子活性筛选的一种新方法;利用该系统筛选获得了一种新的广谱高活性启动子CCAU.

关键词：腺病毒、双荧光素酶报告系统、启动子、CCAU

所属期刊栏目：22

分类号：Q939;Q4;Q782(微生物学)

资助基金：“重大新药创制”科技重大专项资助No.2013ZX09102-060,上海工程技术研究中心专项资助No.12DZ2251600.Project supported by the Major Science and Technology Special Project for "Significant New Drug Creation"No.2013ZX09102-060,and the Shanghai Engineering Technology Research Center ProjectNo.12DZ2251600

在线出版日期：2015-09-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：420-426