HMGB1基因沉默促进多柔比星诱导的胃癌BGC-823细胞自噬及凋亡

摘要：

目的:探讨高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)基因沉默对化疗药物多柔比星(doxorubicin,DOX)诱导BGC-823胃癌细胞发生自噬和凋亡的影响.方法:MTT、Western blotting和激光共聚焦显微镜分别检测DOX对BGC-823细胞增殖及微管相关蛋白轻链3-Ⅰ(microtubule light chain-3 Ⅰ,LC3 Ⅰ)、LC3Ⅱ表达和自噬小体形成的影响.构建靶向HMGB1的shRNA载体pSuper-shHMGBl及其对照载体pSuper-shNC并转染BGC-823胃癌细胞,建立HMGB1稳定沉默的细胞系.DOX处理不同质粒转染组的BGC-823胃癌细胞,激光共聚焦显微镜观察HMGB1沉默对DOX诱导的自噬小体形成的影响,MTT法、流式细胞术分别检测对细胞增殖和凋亡的影响,Western blotting检测对自噬及凋亡相关蛋白(HMGB1、LC3、Bcl-2、Bcl-XL、Mcl-1和激活型caspase-3)表达的影响.结果:DOX可上调BGC-823细胞中LC3-Ⅱ蛋白的水平和促进细胞自噬体的形成(P＜0.01).与对照组相比,HMGB1基因沉默可减少DOX诱导的胃癌细胞自噬[(19.33 ±2.96)％ vs (71.67±3.38)％,P＜0.01],促进胃癌细胞发生凋亡[(46.12±3.15)％vs (12.37±2.84)％,P＜0.05],上调激活型caspase-3的表达水平.进一步分析发现,DOX诱导胃癌细胞发生自噬时,Mcl-1的降解增加,而Bcl-2和Bcl-XL表达无明显变化;HMGB1基因沉默可抑制DOX诱导的Mcl-1降解.结论:DOX可诱导BGC-823胃癌细胞发生自噬,HMGB1基因沉默有助于逆转胃癌细胞对DOX的耐药性,促进胃癌细胞发生凋亡.

关键词：高迁移率族蛋白1基因、多柔比星、短发夹RNA、BGC-823细胞、胃癌、自噬、凋亡、耐药性

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分类号：R735.2;R730.54(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目No.81101558;福建省自然科学基金资助项目No.2012J01364;教育部博士点基金资助项目No.20113518120002.Project supported by the National Natural Science Foundation of China No.81101558,the Natural Science Foundation of Fujian Province No.2012J01364,and the Fundation for the Doctoral Program from the Ministry of Education of China No.20113518120002

在线出版日期：2015-01-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：610-616