p70/p85核糖体蛋白S6激酶1重组真核表达载体的构建及其在人乳腺癌MCF-7细胞内功能的初步鉴定

摘要：

目的:构建p70核糖体蛋白S6激酶1(p70 ribosomal protein S6 kinase 1,p70 S6K1)及p85 S6K1基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,并鉴定其在人乳腺癌MCF-7细胞内的表达及功能.方法:以pRK7-HA-S6K1为模板,采用PCR扩增出目的基因片段p70 S6K1、p85 S6K1,克隆人真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag构建重组表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,采用PCR、双酶切和DNA测序鉴定.将重组载体转染MCF-7细胞,24h后采用Western blotting方法检测细胞内p70 S6K1、p85 S6K1蛋白的表达;同时向转染细胞内加入1mmol/L H2O2处理36 h,观察p70 S6K1、p85 S6K1蛋白对H2 O2诱导的细胞死亡的影响.结果:成功扩增得到p70 S6K1、p85 S6K1基因片段并构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,重组载体经PCR、双酶切鉴定均出现p70 S6K1和p85S6K1预期条带,DNA测序结果显示其全长基因阅读框完整、正确.重组载体在MCF-7细胞中高效表达flag-p70 S6K1和flag-p85S6K1,且p85 S6K1能增强H2O2诱导的细胞死亡.结论:成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,均能在MCF-7细胞中高效表达,且p85 S6K1能够增强H2O2诱导的细胞死亡.

关键词：核糖体蛋白S6激酶1、基因重组、载体构建、真核表达、细胞死亡、乳腺癌、MCF-7细胞

所属期刊栏目：21

分类号：R737.9;R730.54(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金青年项目No.81302357;广东省自然科学基金博士启动项目No.S2013040016493;广东省高校优秀青年创新人才培养计划项目育苗工程[自然科学] No.2013LYM0075.Project supported by the National Natural Science Foundation for Young Taleats of ChinaNo.81302357,the National Nautral Foundation of Guangdong ProvinceNo.2013040016493,and the Foundation for Distinguished Young Talents in Higher Education of Guangdong Province No.2013LYM0075

在线出版日期：2014-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：459-463