沉默HerpUD1基因表达提高人肝L-02细胞对放射处理的敏感性

摘要：

目的:利用RNA干扰技术沉默人肝L-02细胞内可诱导的同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1(homocysteine-inducible,endoplasmic reticulum stress-inducible,ubiquitin-like domain member 1,HerpUD1)基因表达,探讨其对人肝L-02细胞的辐射增敏作用.方法:根据HerpUD1基因序列设计shRNA片段,构建靶向HerpUD1基因的shRNA表达载体,稳定转染L-02细胞,采用real-time PCR和Western blotting检测转染后细胞中HerpUD1 mRNA及蛋白的表达.以8GyX射线照射转染后细胞,Hoechst荧光染色观察细胞的凋亡情况.结果:成功构建靶向HerpUD1的真核表达干扰载体,并建立稳定转染shHerpUD1的L-02细胞株.在稳定转染的L-02细胞中,shHerpUD1-1420干扰片段干扰效果最好,与pGPU6-NC组(阴性对照组)相比,shHerpUD1-1420组HerpUD1 mRNA表达显著下降[(0.15±0.05)vs(1.00±0.08),P＜0.05],其蛋白水平的表达也显著降低[(0.19±0.01)vs(1.62±0.08),P＜0.01].转染后细胞经8Gyx射线照射后24h,L-02-shHerpUD1-1420组细胞凋亡率显著高于L-02-NC组(阴性对照组)[(10.23±3.37)％vs(6.89±1.49)％,P＜0.01],而L-02-NC组与L-02-Neo组相比则无显著差异(P＞0.05).结论:HerpUD1基因表达沉默显著增加X射线辐射引起的L-02细胞凋亡,具有辐射增敏作用.

关键词：RNA干扰、HerpUD1基因、内质网膜蛋白、人肝L-02细胞、放射处理、增敏作用

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分类号：R730.54;R730.55(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30972460;上海市自然科学基金资助项目No.09ZR1415400. Project supported by the National Natural Science Foundation of China30972460;the Natural Science Foundation of Shanghai09ZR1415400

在线出版日期：2013-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：272-277