Polo样激酶3针对P73蛋白的磷酸化位点分析

摘要：

目的:探讨P73蛋白上存在的能够被polo样激酶3(polo-like kinases 3,Plk3)磷酸化的结构域或位点,并分析Plk3对P73介导肿瘤细胞凋亡的影响.方法:免疫共沉淀法检测COS-7细胞中Plk3与P73蛋白之间的相互作用,荧光免疫染色法检测Plk3与P73蛋白在细胞中的定位.制备不同的P73缺失突变体GST融合蛋白,体外点突变法构建GST-P73(1～130)点突变的P73(T86A)(第86位苏氨酸点突变为丙氨酸)质粒,体外磷酸化实验分析P73中被Plk3磷酸化的结构域或位点.通过检测PARP蛋白的裂解分析Plk3对P73介导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响.结果:Plk3与P73蛋白之间存在相互作用,Plk3与P73蛋白共定位于COS-7细胞核中.制备获得不同的P73缺失突变体GST融合蛋白,Plk3在P73蛋白N端第63～113位氨基酸残基之间磷酸化P73蛋白.GST-P73(1～130)融合蛋白第86位苏氨酸点突变为丙氨酸(T86A)之后,不影响GST-P73(1～130)蛋白的磷酸化状态.Plk3可抑制P73介导的HeLa细胞凋亡.结论:Plk3通过与P73蛋白结合,诱导P73蛋白N端第63～113位氨基酸磷酸化,但第86位苏氨酸并非Plk3的特异作用位点;此外Plk3抑制P73介导的HeLa细胞凋亡.

关键词：polo样激酶3(Plk3)、P73、磷酸化、位点、凋亡、宫颈癌细胞

所属期刊栏目：17

分类号：R730.2;Q573(肿瘤学)

资助基金：河北省卫生厅科研基金20090155

在线出版日期：2010-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：280-284