胞嘧啶脱氨酶基因突变体D314A对人结肠癌细胞的抑制作用

摘要：

目的:构建大肠埃希菌胞嘧啶脱氨酶(E. coli cytosine deaminase,EC-CD)基因突变体D314A(即EC-CD基因开放阅读框第314位氨基酸由天冬氨酸突变为丙氨酸)并研究其抗肿瘤作用.方法:构建含EC-CD基因的真核表达质粒pcDNA3.1-CD~(wt),应用点突变技术将pcDNA3.1-CD中EC-CD基因开放阅读框第314位氨基酸的碱基由A突变为C,即构成pcDNA3.1-CD~(D314A).用Lipofectamine ~(TM) 2000将EC-CD基因或D314A基因转入人结肠癌细胞系LoVo细胞,以G418筛选出稳定表达的阳性克隆LoVo-CD~(wt)及LoVo-CD~(D314A).应用MTT法检测EC-CD基因及D314A基因对LoVo细胞的直接杀伤作用及旁观者效应.结果:成功构建EC-CD基因突变体D314A并经测序确认.LoVo细胞转染EC-CD基因及D314A基因后均能表达相应的mRNA,Lovo-CD~(D314A)细胞对5-FC的IC_(50)为(85.13±0.60)mmol/L,显著低于LoVo-CD~(wt)细胞的(689.76±0.45)μmoL/L,(P=0.000);在旁观者试验中,当LoVo-CD~(wt)细胞和LoVo-CD~(D314A)细胞比例均为30%时,细胞存活率分别为(48.5±0.49)%与(17.3±0.40)%(P=0.000).结论:EC-CD基因突变体D314A的抗LoVo细胞作用显著强于野生型EC-CD基因,有望成为新的肿瘤基因治疗候选基因.

关键词：胞嘧啶脱氨酶基因、点突变、自杀基因治疗、结肠肿瘤

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分类号：R735.3~+5;R730.54(肿瘤学)

资助基金：南京市科技局社会发展基金项目No. 200605010.Supported by the Social Development Foundation from Science and Tech-nology Bureau of Nanjing200605010

在线出版日期：2010-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：595-599