10.3872/j.issn.1007-385X.2009.04.006
肿瘤相关抗原OVA66单克隆抗体的制备和鉴定
目的:制备和鉴定人卵巢癌cDNA文库筛选到的肿瘤相关抗原OVA66的单克隆抗体,为研究其生物学功能提供手段.方法:采用基因重组方法构建pET32b-OVA66重组表达质粒,经大肠杆菌诱导表达OVA66融合蛋白,利用Ni-TED亲和层析技术分离纯化His-OVA66融合蛋白;采用经典的杂交瘤技术制备OVA66单克隆抗体;ELISA和Western blotting鉴定单克隆抗体的生物学和免疫学特性,并对OVA66单克隆抗体在细胞免疫荧光法、流式细胞术和免疫组化等方法中进行了初步应用.结果:成功构建重组表达载体pET32b-OVA66,并诱导表达和纯化OVA66融合蛋白.制备获得两株小鼠OVA66单克隆抗体杂交廇细胞株5F4和4G9.两株细胞分泌的抗体亚类均为IgGl,轻链为κ型,亲和力常数Ka分别为2.96×1010和0.4×1010L/mol,初步表位分析结果显示两者针对不同的抗原表位;两株抗体均可以采用细胞免疫荧光和流式细胞术检测OVA66的表达,5174还可通过免疫组织化学检测肿瘤组织中OVA66的表达.结论:成功制备两株特异性的小鼠OVA66单克隆抗体杂交瘤细胞株,为进一步研究OVA66的生物学特性和临床应用奠定了基础.
肿瘤相关抗原、OVA66、单克隆抗体、原核表达、蛋白纯化、ELISA
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R392.11;R730.3
上海市教委科研创新项目08YZ39;上海市免疫学研究所项目08A03
2009-11-03(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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