慢病毒介导bcr/abl基因RNAi对白血病K562细胞生物学特性的影响

摘要：

目的:研究慢病毒介导RNAi致bcr/abl基因长期沉默对K562白血病细胞各种生物学特性的影响. 方法:构建含bcr/abl RNAi序列的pNL-B/A-EGFP慢病毒重组质粒载体并包装病毒,感染K562细胞,挑取稳定转化的克隆(B/A-K562).Real-time PCR及Western blotting验证干扰效应;锥虫蓝染色、集落形成实验检测细胞增殖能力变化;联苯胺染色观察细胞分化;ELISA法检测酪氨酸激酶活性;AO-EB染色观察细胞凋亡;比色法检测Caspase-3、Caspase-9活性;以上检测均以K562细胞和转染空质粒EGFP-K562作对照. 结果:成功构建bcr/abl基因RNAi稳定转染的B/A-K562细胞, Real-time PCR及Western blotting证实B/A-K562细胞中bcr/abl mRNA及P210bcr/abl蛋白含量明显下调.bcr/abl基因稳定下调后,K562细胞倍增时间明显延长(37.1 vs 20.4、23.3 h)、集落形成能力减弱(P<0.01),K562细胞向红系分化,酪氨酸激酶活性下降(P<0.01),自发凋亡率显著提高(P<0.01),细胞中Caspase-3(P<0.05)及Caspase-9(P<0.01)活性明显提高.结论:慢病毒介导的RNAi能实现bcr/abl基因长期沉默,从而抑制K562细胞恶性增殖,诱导其分化及凋亡.

关键词：RNA干扰、白血病细胞、bcr/abl基因、慢病毒、稳定转染

所属期刊栏目：16

分类号：R733.72;R730.54(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30873101

在线出版日期：2009-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：145-150