肝癌选择性溶瘤腺病毒的构建及其体外抑瘤作用

摘要：

目的:构建由AFP基因增强子-启动子调控,并携带自杀基因TK的新型条件复制型腺病毒载体,观察该载体的选择复制能力、溶瘤作用及其与前药GCV联合处理对肝癌细胞的杀伤作用. 方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强子(AFPe),构建表达质粒pAFPp-EGFPluc和pAFPep-EGFPluc,再构建由AFPep调控E1A表达、并携带TK基因的穿梭质粒pDC311-AFPep-E1A/CMV-TK,利用AdMax系统包装腺病毒Ad.AFPep-E1A/CMV-TK;利用Western blotting、病毒增殖测试、细胞病变效应实验、病毒联合前药GCV对肝癌细胞的杀伤实验等鉴定病毒的复制能力、溶瘤作用和对肝癌细胞的杀伤作用. 结果:成功构建的腺病毒载体 Ad.AFPep-E1A/CMV-TK在AFP阳性细胞中选择性复制,病毒自身具有一定的溶瘤作用;该病毒载体联合GCV前药系统处理肝癌细胞后,AFP阳性肝癌HepG2细胞和Hep3B细胞的存活率分别为(10.35±1.07)%、(15.49±5.80)%,AFP阴性的张氏肝细胞和人肺癌NCIH460细胞的存活率分别为(73.55±4.36)%、(74.54±9.89)% (P<0.01).结论:构建的新型溶瘤腺病毒载体具有选择性杀伤肝癌细胞的能力,在肝癌治疗方面有良好的应用前景.

关键词：肝肿瘤、条件复制型腺病毒载体、HSV-1TK基因、甲胎蛋白基因启动子、甲胎蛋白基因增强子、病毒-基因治疗

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分类号：R735.7;R730.54(肿瘤学)

资助基金：国家重点基础研究计划973资助项目2004CB518804;国家自然科学基金杰出青年项目30325043

在线出版日期：2009-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：113-119