氟脲嘧啶促进Egr-1启动子上调人骨髓基质细胞GM-CSF的表达

摘要：

目的:探索氟脲嘧啶(5-FU)对Egr-1启动子上调人骨髓基质细胞造血因子GM-CSF表达的促进作用,以寻找促进化疗所致造血损伤恢复的方法.方法:构建携带Egr-1调控序列启动的GM-CSF和EGFP双顺反子基因的重组真核表达载体(pCIneo-Egr-1-EGFP-IRES-GM-CSF,Egr-EG),通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL,挑出G418抗性的阳性克隆(HFCL/EG).采用RT-PCR检测5-FU处理的HFCL/EG细胞GM-CSF mRNA表达,用FACS和倒置荧光显微镜观察5-FU诱导HFCL/EG细胞EGFP表达的阳性细胞.在加入5-FU的HFCL/EG细胞培养体系中,用ELISA方法检测GM-CSF的含量;将从脐血中分离的单个核细胞接种于5- FU处理后的HFCL/EG培养上清液培养基中,观察其对GM-CFU的增殖作用;采用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸检测5- FU通过活性氧诱导Egr-1启动子CArG序列调控下游基因表达的特异性.结果:构建了Egr-1调控序列启动的双顺反子基因表达载体Egr-EG,获得其转染细胞HFCL/EG.在5- FU处理的HFCL/EG细胞中,RT-PCR显示其GM-CSF mRNA表达增强,流式细胞术证实有EGFP的显著表达.在5-FU处理后,HFCL/EG细胞培养上清液GM-CSF含量和GM-CFU形成数量分别较未处理细胞能明显增高(P<0.01);在5-FU处理的HFCL/EG细胞中,N-乙酰半胱氨酸能明显减少GM-CSF含量(P<0.01).结论:5-FU能促进Egr-1启动子上调人骨髓基质细胞GM-CSF基因的表达,从而对化疗后的造血损伤产生一定的恢复作用.

关键词：Egr-1、5-氟脲嘧啶、粒-巨噬细胞集落刺激因子、骨髓基质细胞、活性氧中间物

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分类号：R730.5;R730.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目39900040;解放军总医院第一附属医院新技术重大项目ZD200502

在线出版日期：2009-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：428-432