人内皮-单核活化多肽-2的重组表达及其活性鉴定

摘要：

目的:采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮-单核活化多肽2(endothelail monocyte-activating polypeptide Ⅱ,EMAP-Ⅱ),并探讨重组EMAP-Ⅱ的抗肿瘤生物学活性.方法:采用pMAL -p2x表达系统和BL-21菌株克隆表达人EMAP-Ⅱ147-312,对表达产物进行纯化.以发光底物法测定重组EMAP-Ⅱ介导人脐静脉内皮细胞ECV-304产生组织因子的活性;以流式细胞术测定其增强ECV-304细胞对于TNFα致凋亡的敏感性;以MTT法检测定其对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制效果.结果:测序证实EMAP-Ⅱ编码序列被正确克隆进表达载体,经诱导表达、纯化,获得重组EMAP-Ⅱ产物,每克菌体(湿重)可获得约500 μg的重组蛋白,纯度为电泳纯.重组EMAP-Ⅱ在体外培养条件下可使ECV-304细胞产生TF因子;并可增强ECV-304细胞对于TNFα介导凋亡的敏感性,使凋亡率明显增加[(16.6±2.5)% vs(25.6±2.3)%,P<0.01];在一定的质量浓度(1 μg/ml)下,EMAP-Ⅱ对SW1990细胞的增殖有一定抑制作用(P<0.05).结论:本研究采用原核表达系统pMAL -p2x可表达高纯度的重组EMAP-Ⅱ,该因子具有良好的抗肿瘤生物学活性.

关键词：内皮-单核活化多肽 2、克隆表达、抗肿瘤、增殖抑制、凋亡

所属期刊栏目：15

分类号：Q71;R730.5(生物大分子的结构和功能)

资助基金：上海市现代生物与新药产业发展基金资助项目024319115

在线出版日期：2008-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：259-263