重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用

摘要：

目的:构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,并探讨其对骨肉瘤E10细胞的促调亡作用.方法:通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪(FCM)检测E10细胞膜表面HER2的表达.将抗HER2单链抗体基因e23sFv与铜绿假单胞菌外毒素PE的转膜结构域基因(PEⅡ)和tBid基因连接,构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,将其克隆入真核表达载体pCMV中构建重组pCMV-ScFv/tBid载体,转染骨肉瘤E10细胞.间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,Annexin V染色流式细胞术及TUNEL法检测E10细胞的凋亡情况.结果:流式细胞仪检测到E10细胞膜表面有HER2的表达.成功构建重组融合蛋白基因质粒 pCMV-ScFv/tBid.重组质粒转染E10细胞后,间接免疫荧光双标记染色检测到E10细胞中tBid的过表达;细胞色素C在细胞质中出现;细胞出现明显的固缩、核浓缩等形态特征.Annexin V染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高(16.1%vs 4.5%);TUNEL染色显示,E10细胞出现典型的凋亡特征.结论:重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid可以在转染的骨肉瘤E10细胞中表达,并诱导骨肉瘤细胞发生凋亡.

关键词：tBid、人表皮生长因子受体2、融合蛋白、骨肉瘤细胞、细胞凋亡

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分类号：R738.1;R730.54(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金39925036;国家自然科学基金30330610;国家自然科学基金30471988;中国博士后科学基金2005038259

在线出版日期：2008-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：105-109