抗γ-精浆蛋白人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库的构建及导向筛选

摘要：

目的:建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库,筛选抗γ-精浆蛋白(γ-sm)人源性抗体轻链.方法:PCR扩增前列腺癌患者外周血淋巴细胞人抗体全套轻链基因,克隆入含鼠源抗γ-sm抗体Fd基因的pComb3X噬粒中,建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库.通过稀释滴定、限制性酶切等分别对库容、基因重组率和多样性进行鉴定.以M13K07辅助噬菌体超感染,利用纯化的γ-sm对杂合库进行筛选,对筛出的阳性克隆进行功能检测.结果:构建了库容量为1.2×107CFU、重组率为90%、多样性好的人-鼠杂合噬菌体抗体库.ELISA检测出2个强阳性克隆,Western blot确证为抗γ-sm的人-鼠杂合Fab,竞争ELISA显示其表观亲和力约为亲本鼠抗体亲和力的71.8%.DNA测序显示筛到的人源轻链可变区基因属IGKV4-1*01胚系家族.结论:成功得到人源性抗γ-sm抗体轻链,为进一步获得全人源化抗体奠定了基础.

关键词：噬菌体抗体库、导向筛选、前列腺癌、人源化

所属期刊栏目：13

分类号：R392.11

资助基金：高比容电子铝箔的研究开发与应用项目2001 AA215321

在线出版日期：2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：32-36