血管基膜衍生多功能肽基因克隆、表达及空间构象分析

摘要：

目的:构建血管基膜衍生多功能肽克隆和原核表达载体,并对血管基膜衍生多功能肽氨基酸序列进行空间结构分析预测.方法:用人源性IgG3上游铰链区连接肽连接的Tumstatin的2个功能区片段,即血管基膜衍生多功能肽(VBM-DMP),利用合成的3条长引物片段,进行PCR扩增.克隆到pUC19载体,酶切和测序鉴定.亚克隆构建原核表达载体pGEX-4T-1-VBMDMP,IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表达产物.用Glutathione Sepharose4B层析柱进行了亲和层析鉴定.将VBMDMP序列输入计算机,利用Antheprot软件分析.结果:血管基膜衍生多功能肽(VBMDMP)基因经限制性内切酶酶切和测序鉴定,其大小和核苷酸序列正确,与设计完全一致.获得了原核表达融合蛋白GST-VBMDMP.Antheprot分析显示,人IgG3上游铰链区连接后的Tumstatin的2个功能区域能自由伸展.结论:成功构建了血管基膜衍生多功能肽克隆和原核表达载体,并对其进行了空间结构分析.

关键词：血管基底膜、衍生肽、IgG3上游铰链区、Tumstatin、原核表达、空间构象

所属期刊栏目：10

分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：湖南省卫生厅科研项目2001-Y055;湖南省教育厅科研项目99C202

在线出版日期：2004-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：185-189