抗人肝癌单克隆抗体HAb18 Fd及轻链基因的克隆与鉴定

摘要：

目的:克隆抗人肝癌单抗HAb18 Fd及轻链基因,并对其可靠性和准确性进行验证.方法:从分泌单抗HAb18的杂交瘤细胞株中提取总RNA,利用RT-PCR扩增抗体Fd及轻链基因,连入pMD18T载体后,挑选阳性克隆进行序列测定并利用相应的软件对序列进行分析.然后将轻链及Fd基因依次克隆到噬菌体展示载体pComb3中,转化大肠杆菌XL1-blue并利用辅助噬菌体M13K07进行挽救,收获噬菌体后利用间接ELISA方法检测其抗原特异性.结果:扩增的HAb18全长轻链和Fd基因大小分别为665 bp和668 bp,序列分析显示:VH及VL均含有2个特征性的半胱氨酸,CH1属于IgG1亚类,CL属于κ亚型.ELISA证实,Fab基因表达产物具有与相应抗原特异结合的活性.结论:成功克隆了肝癌单抗HAb18的Fd及轻链基因,为下一步构建多种形式的基因工程抗体奠定了良好的基础.

关键词：肝癌、单克隆抗体、基因、克隆

所属期刊栏目：10

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA215101;国家自然科学基金3020330

在线出版日期：2003-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：105-109