抗PSA单链抗体/p53四聚功能域融合基因的构建及表达

摘要：

目的: 构建抗人前列腺特异抗原(PSA)单链抗体(scFv)/人p53四聚功能域融合基因,并进行真核表达和活性测定. 方法: 利用递归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p53四聚功能域融合基因,克隆入pUC19载体中构建pUC19/IgG3/p53克隆载体.将抗PSA scFv克隆入pUC19/IgG3/p53载体中,构建抗PSA scFv/人p53四聚功能域融合基因.经酶切鉴定及序列测定证实后,将融合基因克隆入真核表达载体pSecTag2-B中,转染HeLa细胞进行表达,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定. 结果: 获得了抗PSA scFv/人p53四聚功能域融合基因,基因全长891 bp,可编码297个氨基酸,与已发表的抗PSA scFv、人IgG3上游铰链区和人p53四聚功能域基因cDNA序列一致.表达产物经SDS-PAGE和Western印迹实验证实为约35 kD的特异蛋白条带,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合PC-3细胞,亲和力高于scFv. 结论: 获得了可与PC-3细胞特异结合的抗PSA scFv四聚体,为进一步临床应用奠定基础.

关键词：前列腺特异抗原、p53四聚功能域、融合基因

所属期刊栏目：10

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金39900180;军队重点实验室基金1997-71-22

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：54-57