双靶向组织特异性HSV-tk/GCV抗瘤系统的构建及体外效应研究

摘要：

目的:构建高靶向性基因转移及表达系统,并研究其介导HSV-tk/GCV自杀基因系统对肝癌细胞的体外杀伤作用.方法:通过重组技术分别构建anti-TfR ScFv-GALA融合蛋白表达载体ScFv-GALA-pET28a及含AFP启动子、GALA特异性识别序列(GAL4rec)的HSV-tk真核表达载体pEBAF/tk-GALArec.IPTG诱导后,利用受体介导内吞作用介导pEBAF/tk-GALArec质粒转染表面均高表达TfR的人肿瘤细胞株HepG2,SMMC7721及A549.潮霉素筛选后,MTT法检测GCV对它们的杀伤作用.结果:双酶切鉴定、SDS-PAGE电泳及测序分别证明anti-TfR ScFv-GALA融合蛋白及重组pEBAF/tk-GALArec真核表达质粒构建成功.体外杀伤实验中,高分泌AFP(845 ng/ml)的HepG2/tk细胞对GCV很敏感,且抑制率与GCV浓度及作用时间呈正相关;而低分泌AFP(2 ng/ml)的SMMC7721/tk细胞对GCV低度敏感;不分泌AFP的A549/tk细胞则不敏感.结论:双靶向组织特异性HSV-tk/GCV抗瘤系统构建成功,并显示出很好的靶向性.

关键词：HSV-tk基因、转铁蛋白受体、GALA、受体介导内吞

所属期刊栏目：9

分类号：R730.59-3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金39970693

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：243-247