基因工程人干细胞因子原核表达、纯化及生物学活性研究

摘要：

目的:摸索一种适合于中试生产的重组人干细胞因子(recombinant human stem cellfactor,rhSCF)的发酵表达与纯化工艺.方法:研究不同培养基和热诱导时间对rhSCF表达量影响;探索最佳纯化工艺和各因素对rhSCF得率和生物学活性的影响.结果:rhSCF工程菌在含甘油、酪蛋白水解物、酵母浸出粉、胰蛋白胨及微量元素的培养基中表达量最高.灰度扫描显示热诱导后2 h开始表达,6 h表达量最高,目的蛋白约可达菌体总蛋白30%.高表达蛋白经复性后,可用酸沉淀作粗分离纯化,随后用阳离子交换层析分离,纯度达80%,经反相层析去除二聚体后,最后用DEAE柱浓缩后并经S200转换缓冲液,最终获得纯度＞95%和比活性＞6×105 U/mg的rhSCF制品.结论:成功地建立了注射用rhSCF的中试生产工艺,为随后进行的临床前研究及临床试验奠定基础.

关键词：干细胞因子、蛋白纯化、蛋白表达

所属期刊栏目：9

分类号：TQ929+.1;TQ937(其他化学工业)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：126-128