Ribozyme对癌基因ki-rasG12V mRNA的剪切及其特异性

摘要：

目的：设计切割ki-rasG12vmRNA的特异性ribozyme(Rz217)，明确其对癌基因ki-rasG12VmRNA的细胞内外切割活性，为以ki-rasG12VmRNA为特异性靶分子的基因治疗及癌基因ki-ras的功能研究提拱一种新的途径。方法：依Symons总结的"锤头结构"原理，设计一种能特异性切割ki-rasG12VmRNA的ribozyme，利用DNA重组技术构建ki-rasG12V外显子1和ri-bozyme Rz217的体外转录质粒及ribozyme Rz217的真核表达质粒，体外转录获得ribozyme Rz217及ki-rasG12V外显子1 mRNA，在含Mg2+溶液中ribozyme Rz217对其靶RNA分子进行切割。以RT-PCR对转染ribozyme Rz217真核表达质粒的细胞ki-rasG12VmRNA进行半定量分析。结果：ki-rasG12V外显子1体外转录mRNA分子，能被ribozyme Rz217定点切割而野生型ki-ras外显子1体外转录mRNA则不被切割；转染ribozyme Rz217的胰癌细胞ki-rasG12VmRNA含量减少，而转染ribozyme Re217的肝癌细胞其内源性ki-ras mRNA含量无明显变化。结论：ribozyme Rz217无论在细胞内外均能剪切突变型ki-ras mRNA(G12V)而且其切割作用为突变型ki-rasG12VmRNA特异性的。

关键词：ki-rasG12VmRNA、核酶、特异性定点切割

所属期刊栏目：7

分类号：Q522+.2(核酸)

资助基金：国家自然科学基金39670343

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：275-278