Bcl-x mRNA前体剪接转换寡核苷酸诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究

摘要：

目的:探讨Bcl-x mRNA前体剪接转换寡核苷酸(Bcl-x splice-switching oligonucleotides,Bcl-x SSO)对胶质瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响.方法:设计靶向Bcl-x基因下游选择性5 '端剪接位点的Bcl-x SSO,β-globin SSO作为阴性对照SSO.SSO经2'-甲氧乙基(2'-O-methoxyethyl,MOE)、全硫代磷酸化(phosphorothioate,PS)修饰.采用阳离子脂质体将不同的SSO转染至U251细胞.采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测Bcl-x SSO对U251细胞的增殖抑制率.流式细胞术定量检测U251细胞的凋亡率.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Bcl-x SSO对Bcl-xL、Bcl-xS mRNA表达水平的影响,Western blot方法检测Bcl-x SSO对Bcl-xL、Bcl-xS蛋白表达的影响.结果:MTT结果显示Bcl-x SSO显著抑制U251细胞的增殖,且抑制作用呈剂量依赖性.流式细胞术检测Bcl-x SSO能够明显促进U251细胞凋亡.RT-PCR检测Bcl-x SSO处理组Bcl-xL mRNA表达水平下降,Bcl-xS mRNA表达水平升高.Western blot检测Bcl-x SSO处理组Bcl-xL蛋白表达水平下降,Bcl-xS蛋白表达水平升高.结论:在胶质瘤细胞U251中,Bcl-x SSO可特异性的作用于Bcl-x mRNA前体,调节其选择性剪接模式从Bcl-xL转换至Bcl-xS,进而促进U251细胞凋亡.

关键词：选择性剪接、寡核苷酸、凋亡、流式细胞术、胶质瘤细胞

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分类号：R73;TP3

资助基金：本文课题受国家自然科学基金30672159;教育部“新世纪优秀人才支持计划”NCET-06-0306;吉林省科技发展计划国际科技合作项目20130413028GH;The National Natural Science Foundation of China30672159;"Program for New Century Excellent Talents," Ministry of Education of ChinaNCET-06-0306;Jilin Provincial Science and Technology Development Plan of International Science and Technology Cooperation Projects20130413028GH

在线出版日期：2014-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：359-362