EBP50影响HeLa细胞微丝骨架的分布和定位

摘要：

目的:通过研究与膜-细胞骨架连接蛋白(ezrin-radixin-moesin,ERM)家族相结合的磷酸化蛋白50(ERM-bindingphospho-protein-50,EBP50)对HeLa细胞微丝骨架含量、分布的影响及受血小板源性生长因子PDGF(platelet-derired groWth factor)刺激后,微丝骨架在细胞中定位的变化及微丝骨架定位变化与EBP50的关系,阐明EBP50蛋白影响肿瘤细胞生长迁移的分子机制.方法:将pBK-CMV-HA空载体和pBK-CMV-HA-EBP50wt重组质粒分别转染HeLa细胞系,G418进行稳定表达细胞系的筛选,并用Western免疫印迹方法进行蛋白表达的鉴定;利用Western免疫印迹、免疫荧光细胞化学染色等方法结合光镜和激光共聚焦扫描显微镜分别观察和分析HA-HeLa与HA-EBP50-HeLa微丝骨架的含量及分布的异同;然后使用10ng/ml和20ng/mlPDGF 37℃刺激细胞15min后,分别观察及分析两组细胞微丝骨架的分布情况及EBP50在细胞中定位的变化.结果:Western免疫印迹鉴定证实转染的外源性EBP50 cDNA片段可在HeLa细胞系中成功表达EBP50蛋白,证明获得稳定表达EBP50蛋白的HeLa细胞系.Western免疫印迹及免疫荧光结果证实,转染空载pBK-CMV-HA的HeLa细胞微丝骨架粗大疏松,方向不一,交错排列:与其相比.EBP50虽然对HeLa细胞微丝骨架的含量没有明显影响,但能够促使细胞微丝骨架呈致密细丝状,平行规则排列,并沿细胞极性分布;并且在PDGF刺激下,EBP50能够与微丝骨架一起自胞浆迁移至膜上,并共定位.结论:EBP50能改变HeLa细胞微丝骨架的分布.在受到PDGF刺激时,EBP50还能使HeLa细胞系的微丝骨架定位于膜表面.EPB50可能通过影响微丝骨架的分布和定位来发挥其影响肿瘤细胞生长迁移的功能.

关键词：微丝骨架、HeLa细胞、EBP50

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分类号：R33;R73

资助基金：本文课题受国家自然科学基金30572183,30772573;北京教委重点基金KZ200610025013;北京市新世纪优秀人才支持计划NCEF-06-0184;北京市优秀人才培养项目资助20071D0501800253

在线出版日期：2009-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1192-1195