双自杀基因系统对乳腺癌细胞体外特异性杀伤作用

摘要：

目的:探讨腺病毒介导VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CD/TK)对乳腺癌细胞MCF-7的体外靶向杀伤作用.方法:用重组腺病毒Ad-VEGFP-CD/TK体外感染表达VECF的MCF-7细胞和不表达VEGF的原代培养的乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察其感染率,并以RT-PCR、Western blot方法检测受感染细胞CD/TK的表达,然后给予前药GCV和5-FC,用MTT法观察该体系对细胞生长增殖的影响;电镜观察细胞的病变;用流式细胞术观察细胞内DNA含量的变化;分光光度法检测细胞内Caspase-3活性.结果:腺病毒对两种细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增.RT-PCR和Western blot检测发现转染Ad-VEGFP-CD/TK的MCF-7细胞有目的基因和蛋白的表达,而乳腺上皮细胞无表达.MTT法检测显示表达VECF的MCF-7细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达VEGF的乳腺上皮细胞对前药不敏感.在感染复数为100时,电镜下可见用药组MCF-7细胞有凋亡改变.用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;且随着前药浓度的升高转基因细胞内Caspase-3活性逐渐升高.结论:VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤人乳腺癌细胞MCF-7并诱导细胞凋亡,细胞内Caspase-3活性升高可能是其诱导细胞凋亡的机制之一.

关键词：乳腺癌、基因治疗、腺病毒、凋亡

所属期刊栏目：35

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA217171;广东省自然科学基金013072

在线出版日期：2008-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：104-108