短发夹RNA抑制肝癌细胞HepG2 COX-2基因表达的探讨

摘要：

目的:研究shRNA对肝癌细胞株HepG2中COX-2基因表达的抑制作用,同时检测对细胞周期和细胞生长的影响.方法:设计、合成一对环氧化酶-2(COX-2)基因编码的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,定向克隆至质粒载体pGenesil-1,构建抑制COX-2基因的短发夹RNA(short hairpin RNA shRNA)的重组表达质粒pshRNA-COX-2,用脂质体LipofectamineTM2000转染肝癌细胞HepG2,经RT-PCR和Western blot分别检测pshRNA-COX-2重组表达质粒对COX-2 mRNA和蛋白抑制效应,流式细胞仪检测细胞周期、细胞计数检测细胞生长变化.结果:pshRNA-COX-2重组表达质粒能够抑制COX-2基因表达.与未转染肝癌细胞HepG2相比,pshRNA-COX-2重组表达质粒转染肝癌细胞后,COX-2 mRNA和蛋白表达明显降低,抑制率分别为69.9%和50.3%;G0-G1期细胞由55.4%上升为77.9%,S期细胞由31.1%下降为16.2%;细胞生长明显减慢.结论:构建的pshRNA-COX-2重组表达载体能够显著抑制COX-2基因表达;引起G0-G1期细胞增多,S期细胞减少,从而阻止肝癌细胞生长.

关键词：短发夹RNA、环氧化酶-2、重组表达质粒、细胞周期

所属期刊栏目：34

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：重庆市自然科学基金2006BB5271

在线出版日期：2007-07-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：566-569