Ki67基因RNA干扰腺病毒表达载体的构建及其抗结肠肿瘤作用研究

摘要：

目的:构建针对肿瘤增殖基因Ki67的小干扰RNA(Ki67-siRNA)腺病毒表达载体,体外研究其对人结肠癌细胞株SW620细胞生长影响,为结肠癌的基因治疗提供参考.方法:设计可形成小发夹结构的Ki67-siRNA对应模板DNA序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pCA13,构建Ki67-siRNA表达质粒pCA13-Ki67.鉴定正确后,将pCA13-Ki67与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染至293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒Ad-Ki67.大量扩增Ad-Ki67,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度.Ad-Ki67感染人结肠癌细胞,结晶紫染色法检测细胞病理作用,MTT法检测细胞存活,Western印迹法检测Ki67表达.结果:酶切分析、测序鉴定表明pCA13-Ki67构建成功,PCR分析表明Ad-Ki67含有Ki67-siRNA序列.Ad-Ki67可显著抑制Ki67蛋白表达及结肠癌细胞生长.结论:含有Ki67-siRNA的重组腺病毒构建成功,其能抑制人结肠癌细胞Ki67基因表达和生长.

关键词：Ki67基因、RNA干扰、腺病毒载体

所属期刊栏目：34

分类号：R735.3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30570385;卫生部科研项目WKJ2005-2-026

在线出版日期：2007-04-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：190-193