组蛋白三甲基化转移酶SETD2对肺腺癌上皮-间充质转化的影响

摘要：

[目的]研究组蛋白三甲基化转移酶SETD2与肺腺癌的临床相关性及其在肺腺癌组织中的表达,探讨SETD2对肺腺癌细胞株A549和H1975增殖、迁移、侵袭能力及上皮-间充质转化(EMT)过程的影响.[方法]结合癌症基因组图谱数据库(TCGA),分析SETD2的表达水平与肺腺癌患者总生存期(OS)的相关性.分别应用Real-time PCR和Western blot方法检测SETD2mRNA和蛋白在人肺腺癌组织芯片(包含12对肺腺癌组织标本)中的表达情况.构建慢病毒载体过表达Lv-SETD2-A549、Lv-SETD2-H 1975稳转细胞株,沉默Si-SETD2-A549、Si-SETD2-H 1975稳转细胞株及阴性对照组Lv-NC、Si-NC稳转细胞株.通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法、细胞划痕和Transwell小室实验,分别检测过表达和沉默SETD2对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.采用Western blot方法比较4组细胞株中EMT相关蛋白上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vi-mentin)及正常对照组(GADPH)的表达水平差异;应用免疫荧光法检测4组间E-cadherin、Vimentin的表达水平.[结果] (1)SETD2表达与肺腺癌患者OS成正相关(P=0.014).(2)SETD2mRNA和蛋白在肺腺癌组织中表达明显下降,且与临床分期明显相关(P=0.001).(3)与Lv-NC组相比,A549和H1975在SETD2过表达组中SETD2mRNA和蛋白显著升高,细胞相对增殖活性(A549-0h:0.18±0.02,A549-24h:0.22 ±0.04,A549-48h:0.35 ±0.06,A549-72h:0.55 ±0.05:H 1975-0h:0.21 ±±0.02,H 1975-24h:0.31±±0.04,H 1975-48h:0.43±0.03,H1975-72h:0.71±±0.09),细胞穿膜数(A549:54.00±11.23;H1975:57.13±10.28)均显著下降,迁移间距(A549:0.65±0.09;H1975:0.51±0.10)降低;这些指标,在SETD2沉默组中恰恰相反.(4)与阴性对照组相比,过表达SETD2可上调A549、H1975细胞株中E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、Vimentin的蛋白表达水平;这些指标在SETD2沉默组中则相反;免疫荧光实验结果显示过表达SETD2的A549和H1975组E-cadherin的红色荧光强度较Lv-NC组增强,而Vimentin的绿色荧光较Lv-NC组明显减弱.[结论]SETD2在肺腺癌组织中表达下降,SETD2低表达组患者OS较高表达明显下降.上调SETD2表达水平能够有效抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且逆转其发生EMT,抑制SETD2的表达则可诱导上述过程;SETD2可能发挥抑癌作用.

关键词：组蛋白三甲基化转移酶SETD2、肺腺癌、增殖、迁移、侵袭、上皮-间充质转化

所属期刊栏目：29

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;中国博士后科学基金;江苏省自然科学基金;江苏省“六大人才高峰”基金;江苏省青年医学人才基金

在线出版日期：2020-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：140-147