CENPK基因过表达载体的构建及鉴定

摘要：

[目的]构建着丝粒蛋白K (cetromere protein K,CENPK)基因过表达载体,并对其在肝癌FOCUS细胞中的表达进行鉴定.[方法]①从人肝癌组织中扩增出CENPK目的基因并将其克隆到pCMV-3Tag-3载体上,构建真核表达载体pCMV-CENPK;②利用脂质体法将构建好的pCMV-CENPK真核表达载体转染肝癌FOCUS细胞,并用G418筛选出CENPK基因稳定过表达的肝癌FOCUS细胞株;(③通过Real-time PCR及Western Blot的方法对筛选出来的细胞进行鉴定.[结果]①经双酶切分析及测序验证,成功构建了真核表达载体pCMV-CENPK.②通过Real-time PCR及Western blot的方法鉴定,CENPK基因在筛选出来的肝癌FOCUS细胞株中成功过表达.[结论]成功构建真核表达载体pCMV-CENPK并使其在肝癌FOCUS细胞中稳定过表达,为进一步研究CENPK基因在肝癌发生发展中的作用奠定了基础.

关键词：CENPK基因、过表达、真核表达载体、肝癌FOCUS细胞

所属期刊栏目：24

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81372227;深圳市科技计划项目CXZZ20130515163643

在线出版日期：2015-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：505-509