细胞周期蛋白C基因克隆与重组质粒pCMV-tag2B-CCNC的构建与鉴定

摘要：

[目的] 克隆人细胞周期蛋白C基因(human cyclin C,CCNC),构建真核表达载体,诱导并鉴定其表达.[方法] 利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法,以急性淋巴细胞性白血病细胞株6T-CEM mRNA为模板,扩增CCNC基因,将克隆获得的CCNC全长cDNA片段构建重组表达载体pCMV-tag2B-CCNC,用脂质体Lifefectamine2000将重组质粒转染至6T-CEM细胞系,诱导其表达,Western Blot鉴定其表达.[结果] 电泳获得944bp预期序列,pCMV-tag2B-CCNC经双酶切鉴定及序列分析证实为正确的有完整读码框的CCNC基因,将pCMV-tag2B-Sorcin导人6T-CEM细胞并成功表达,目的蛋白经Western blot鉴定具有生物学活性.[结论] 经测序及酶切鉴定,成功克隆了CCNC的cDNA,并成功构建了CCNC真核表达质粒pCMV-tag2B-CCNC,重组质粒能表达具有生物学活性的CCNC蛋白,为研究CCNC的功能打下了基础.

关键词：人细胞周期蛋白C基因、基因克隆、pCMV-tag2B-CCNC、质粒构建

所属期刊栏目：17

分类号：R730.23(肿瘤学)

在线出版日期：2008-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：806-809