产油核桃内生细菌乙酰辅酶A羧化酶acb基因克隆及优化表达

摘要：

为了探究细菌异质性乙酰辅酶A羧化酶β亚基生物活性及其对乙酰辅酶A羧化酶酶活影响,以高产油核桃内生细菌B.subtilis HB1310基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增其乙酰辅酶A羧化酶羧基转移酶β亚基(β-CT)基因(acb基因),构建pET-28a-acb载体并在E.coli BL21中表达,进一步对乙酰辅酶A羧化酶acb基因的诱导表达条件进行了优化.结果表明:乙酰辅酶A羧化酶acb基因在E.coli BL21中实现了表达,分子质量在25～35 kDa之间;重组蛋白最佳诱导表达条件为诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度1.0 mmol/L、诱导时间6 h、诱导初始pH 8.0,在此条件下工程菌的乙酰辅酶A羧化酶活性可达(4.11±0.03)U/mL,较野生菌提高39.7％.综上,乙酰辅酶A羧化酶β-CT为具有较好生物活性的乙酰辅酶A羧化酶亚基.

关键词：核桃内生细菌、产油、乙酰辅酶A羧化酶、克隆、优化表达

所属期刊栏目：48

分类号：Q78;TS222.1(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金;安徽工程大学中青年拔尖人才计划项目

在线出版日期：2023-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：99-104