大豆巯基肽的共价色谱法制备及其MALDI-TOF-MS分析

摘要：

建立了一种从复杂的大豆球蛋白酶解物中提取巯基肽的高选择性方法.首先,对大豆球蛋白酶解物中的二硫键用1,4-二硫苏糖醇进行还原,对还原剂的用量进行了考察和优化,提高了酶解物中的巯基肽含量.然后用Thiopropyl-Sephrose 6B共价色谱制备还原酶解物中的巯基肽,对共价色谱的吸附、解吸条件进行了考察和优化.研究表明:二硫键还原最佳1,4-二硫苏糖醇用量为20 mmol/L,还原之后酶解物中的巯基含量从1.8 μmol/g提高到了113.8 μmol/g.共价色谱的最佳条件为还原酶解物的上样量为酶解物中巯基含量占凝胶活性位点的80％,键合时间30 min;解吸时1,4-二硫苏糖醇浓度20 mmol/L,解吸时间20 min.此外,C18柱可以有效地将巯基肽中的1,4-二硫苏糖醇和2-巯基吡啶去除.MALDI-TOF-MS分析表明制备的巯基肽中可检测到45个肽段,其中36个肽段含有巯基,表明Thiolpropyl-Sepharose 6B共价色谱对巯基肽有很高的选择性.

关键词：大豆球蛋白酶解物、巯基肽、还原、Thiolpropyl-Sepharose 6B、MALDI-TOF-MS

所属期刊栏目：41

分类号：TS229;TQ937(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金31201380;江苏省自然科学基金BK2011151

在线出版日期：2017-02-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：31-36