基于Ang Ⅱ诱导心肌细胞凋亡探讨中医药在离体实验中的研究方法
目的:基于Ang Ⅱ诱导心肌细胞凋亡模型的建立,探讨离体实验中中药复方的研究方法.方法:以原代心肌细胞、心肌细胞株H9c2为研究对象,含药血清为介质,Ang Ⅱ为刺激因子,建立凋亡模型,采用MTT、流式、荧光定量PCR、DAPI染色检验凋亡率及凋亡相关基因的表达.结果:①以原代心肌细胞为研究对象,胎牛血清为介质,分为正常组和Ang Ⅱ组(1×10-6mol/L),MTT及流式结果显示:与正常组比较,Ang Ⅱ可以降低原代心肌细胞活性,诱导心肌细胞发生凋亡(P＜0.05);荧光定量PCR结果显示:与正常组比较,Ang Ⅱ可以促进促凋亡基因Bax、Caspase-3的表达,降低抗凋亡基因Bcl-2的表达(P＜0.05).②以心肌细胞株H9c2为研究对象,鼠血清为介质,分为正常组(10％正常鼠血清)、Ang Ⅱ组(1×10-6mol/L+10％正常鼠血清)、中药组(1×10-6mol/L+10％中药鼠血清),MTTT、流式及DAPI结果显示:与正常组比较,Ang Ⅱ可降低H9c2细胞活性,诱导H9c2发生凋亡(P＜0.05),加参方可干预Ang Ⅱ作用(P＜0.05).③以心肌成纤维细胞为研究对象,分为无血清组、胎牛血清组、胎牛血清+Brdu组、鼠血清组,MTT检测心肌成纤维细胞活性,结果显示:与无血清组比较,胎牛血清、鼠血清均能促进心肌成纤维细胞增殖,鼠血清促进心肌成纤维细胞增殖更明显.结论:在建立凋亡模型、研究药物的抗凋亡作用的试验中,由于采用鼠血清培养原代心肌细胞,心肌成纤维细胞增殖明显,使原代心肌细胞的纯度明显降低,进而影响实验结果,含药血清并不适合作为中药媒介与原代心肌细胞相结合进行研究.
心肌细胞、含药血清、Ang Ⅱ、凋亡
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R542.2;R285.5;R318
2017-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
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