锌指蛋白ZFP580在全反式维甲酸调节大鼠血管平滑肌细胞迁移中的作用及机制
目的:探讨锌指基因ZFP580在全反式维甲酸(ATRA)调节VSMCs迁移功能中的作用及其机制.方法:分离,培养并鉴定大鼠主动脉VSMCs;分别予以0、5、10、20μmol/L ATRA刺激VSMCs 24h,以0μmol/L ATRA组为对照组,观察不同溶度ATRA刺激不同时间对VSMCs迁移能力的影响或给予0、20μmol/L ATRA刺激VSMCs 24、48、72h,观察ATRA刺激不同时间对VSMCs迁移能力的影响;QPCR及Western blot检测ATRA刺激VSMCs后ZFP580的mRNA和蛋白表达变化;应用ERK抑制剂PD98059抑制ERK的蛋白表达,观察ERK信号蛋白表达变化对ATRA刺激后ZFP580蛋白表达的影响;腺病毒转染技术获得过表达或低表达ZFP580的VSMCs,QPCR及West-ern blot检测MMP-2和MMP-9、ZFP580蛋白和mRNA表达水平.结果:分离的VSMCs在培养10d后,免疫荧光显示平滑肌细胞特异性标记物SM22α抗体阳性.与对照组相比,5、10、20μmol/L ATRA预刺激分别降低了32%、43%和59%的VSMCs迁移能力;20μmol/L ATRA刺激VSMCs与对照组相比,在24、48、72h分别降低49%、36%和22%细胞迁移能力.ZFP580的mRNA和蛋白表达随着ATRA刺激溶度的增加和刺激时间的延长而升高.ERK在ATRA刺激15min即显著升高,运用ERK抑制剂PD98059(20μmol/L)预处理抑制ERK蛋白表达并降低了ATRA诱导ZFP580的蛋白表达.过表达ZFP580降低MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白表达,反之,低表达ZFP580则上调了MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白表达.结论:ATRA可通过ERK信号通路上调ZFP580的表达,而ZFP580通过调控MMP-2和MMP-9的表达参与ATRA对VSMCs迁移的抑制作用.
ZFP580、血管平滑肌细胞、全反式维甲酸、迁移、大鼠
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R543(心脏、血管(循环系)疾病)
国家自然科学基金;天津市自然科学基金
2020-05-14(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共6页
45-50