miR-148a在5-aza诱导间充质干细胞心肌样分化中的调控作用及机制

摘要：

目的:探讨miR-148a在5-aza诱导人骨髓间充质(hMSCs)成心肌样分化中的表达及miR-148a对hMSCs体外成心肌样分化的生物学作用.方法:免疫荧光检测5-aza诱导hMSCs分化后心肌细胞特异性标志物α-MHC表达水平;qRT-PCR和Western blot分别检测miR-148a和DNMT1在hMSCs成肌样分化中的表达水平.利用Lipofecttamine TM 2000将miR-148a mimics和miR-148a inhibitor分别瞬时转染hMSCs,Western blot检测心肌细胞特异性标志物α-MHC的蛋白表达水平.利用生物信息学技术预测miR-148a的靶基因结合位点利用双荧光素酶报告基因系统鉴定其对靶基因3'UTR的结合序列.通过DNMT1 shRNA和miR-148a inhibitors共转到hMSCs中,研究miR-148a在hMSCs成心肌样分化中的调控作用.结果:hMSCs经5-aza诱导分化后,心肌细胞特性标志物α-MHC蛋白水平明显上调.miR-148a在hBMSCs成肌样分化中显著性增加(P＜0.01),DNMT1表达水平显著降低.过表达miR-148a能提高hBMSC中心肌细胞特异性标志物α-MHC表达水平,而抑制miR-148a则能降低其水平(P＜0.01).DNMT1沉默可以阻断miR-148a对hMSCs的诱导成肌样分化作用.结论:miR-148a在hMCCs成肌样分化中表达上调,通过靶定和调控DNMT1基因的表达,并对hMSCs心肌向分化具有正向调控作用.

关键词：miR-148a、骨髓间充质、心肌样分化、DNMT1

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分类号：R329.2(人体形态学)

资助基金：2015年重庆市基础与前沿研究计划项目cstc2015jcyjA10042;2015年重庆市永川区自然科学基金计划项目Ycstc,2015nc5003

在线出版日期：2018-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：514-518,543