寡核苷酸片段载体的酶切连接和无缝克隆构建方法比较

摘要：

目的 比较酶切连接和无缝克隆方法在构建pCGS3-CK载体上的优缺点,为寡核苷酸片段载体的构建提供参考.方法 酶切连接是需要合成两条互补的寡聚核苷酸单链,然后经过退火形成具有黏性末端的双链结构片段,在DNA连接酶的作用下与具有相同酶切的线性化载体连接,形成环状质粒.无缝克隆是在目标序列两端各加上 15～20 个与载体序列同源性的碱基,然后经过退火形成双链结构的目的片段,在重组酶的作用下与线性化的载体连接,形成环状质粒.结果 从阳性率角度进行比较,酶切连接的阳性率为95.65%,而无缝克隆的阳性率为 89.13%.结论 与无缝克隆方法相比,用酶切连接方法构建寡核苷酸片段载体阳性率高,实验成本低.

关键词：酶切连接、无缝克隆、寡核苷酸、载体构建

所属期刊栏目：13

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2023-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：183-187