肌浆网-内质网钙离子转运ATP酶干扰慢病毒表达载体构建及稳定转染PC12细胞株的建立

摘要：

目的 构建肌浆网-内质网钙离子转运ATP酶(SERCA)基因的干扰慢病毒表达载体,建立稳定转染的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC 12)细胞系.方法 人工设计、合成针对SERCA基因干扰序列,退火后连接到PGLV3干扰载体上,与pGag/Pol、pRev、pVSV-G共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染PC 12细胞,建立稳定细胞株;应用RT-PCR和Western blot技术检测PC 12稳定细胞中SERCA基因和蛋白表达情况,并与对照组进行比较.结果 成功构建了针对SERCA基因的RNAi慢病毒表达载体,病毒滴度为3×10s U·mL-1;建立稳定转染的PC 12细胞株.有效干扰验证显示,shSERCA能明显降低SERCA的mRNA及蛋白水平(P＜0.01).结论 成功构建SERCA基因的shSERCA慢病毒表达载体,建立稳定干扰SERCA表达的PC 12细胞株.

关键词：肌浆网-内质网钙离子转运三磷酸腺苷酶基因、核糖核酸干扰、大鼠肾上腺嗜铬细胞、钙离子转运ATP酶、慢病毒

所属期刊栏目：53

分类号：R965(药理学)

资助基金：国家自然科学基金81573643

在线出版日期：2018-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：951-955