重组CTLA4-Fc融合蛋白的质量研究
目的 建立重组细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)-Fc融合蛋白的质控方法.方法 应用基于CTLA4/IL-2-Luciferace/Jurkat细胞(简称Jurkat细胞)的报告基因法检测重组CTLA4-Fc融合蛋白的生物学活性;表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)测定重组CTLA4-Fc融合蛋白与B7的结合活性测定法;分子排阻高效液相色谱(size exclusion high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)进行纯度分析;等电聚焦电泳(isoelectric focusing,IEF)进行电荷异质性分析;肽图法和毛细管胶束电动色谱(micellar electrokinetic chromatography,MEKC)进行鉴别试验;反相高效液相色谱(reversed phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)进行唾液酸含量测定;亲水高效液相色谱(hydrophilic high performance liquid chromatography,HILIC-HPLC)进行N糖型含量测定等,对重组CTLA4-Fc融合蛋白进行了质量研究.结果 重组CTLA4-Fc融合蛋白的生物学活性EC50值为(0.40±.0.08) μg· mL-1,RSD为20.00％;BIAcore测定与B7相对结合活性为参比品的(91.72±0.12)％,RSD为0.14％;SEC-HPLC分析的纯度为(99.09±0.01)％,RSD为0.01％;还原CE-SDS分析的纯度为(100.00±0.00)％,非还原CE-SDS单体为(98.50±0.17)％,RSD为0.18％;IEF等电点主区带pI范围为4.6 ～5.9;肽图法中供试品与参比品一致;MEKC可对重组CTLA4-Fc融合蛋白及其变体进行有效鉴别;唾液酸含量为(10.16±0.41) mol/mol蛋白,RSD为4.07％;N糖主要糖型的含量:G0F含量为7.5％,G1F含量为15.0％,G2F含量为17.1％,G1FS1含量为4.2％,G2FS1含量为19.5％,G2 FS2含量为9.6％.结论 建立了重组CTLA4-Fc融合蛋白的关键质量属性评价方法,上述方法为抗体融合蛋白类生物制品的质量控制提供参考.
融合蛋白、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4、质量控制、生物学活性
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R917(药物基础科学)
国家重点研发计划课题资助项目2016YCF1200904
2017-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
1855-1861
