独行菜LaMK基因克隆、生物学信息分析及原核表达

摘要：

目的 克隆独行菜强心苷生物合成途径关键酶甲羟戊酸激酶(mevalonate kinase,MK)基因,进行生物信息学分析,原核表达、纯化和组织特异性分析.方法 通过分析独行菜转录组数据,设计基因特异性引物,克隆了LaMK基因的cDNA序列,构建pET-32a-LaMK原核表达载体,诱导表达LaMK重组蛋白.结果 LaMK基因的开放阅读框(opening reading frame,ORF)全长为1 137 bp,编码379个氨基酸.生物信息学分析显示,LaMK蛋白可能定位于细胞质中,没有跨膜区不合信号肽,含有GHMP激酶家族保守结构域和ATP结合位点.系统进化分析显示,LaMK蛋白与拟南芥等十字花科植物的MK蛋白同源性较高.在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达LaMK重组蛋白,利用Ni2亲和色谱得到了纯化的LaMK重组蛋白.荧光定量PCR结果表明,kaMK基因在花中表达量最高,叶和根中次之,茎中较低,在幼苗中表达量最低.结论 本实验为下一步制备LaMK蛋白抗体,研究LaMK基因在独行菜强心苷生物合成途径中的功能奠定了基础.

关键词：独行菜、LaMK基因、基因克隆、生物信息学分析、原核表达

所属期刊栏目：52

分类号：R284(中药学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）;河南省科技攻关计划;河南中医学院博士科研基金

在线出版日期：2017-07-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：924-930