有机阴离子转运体1抑制剂筛选模型的构建及应用

摘要：

目的 建立能稳定表达有机阴离子转运体1(organic anion transporter,OAT1)的马丁达比狗肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞转基因细胞模型,利用该模型初步筛选OAT1的抑制剂.方法 采用脂质体转染法将质粒pcDNA3.1(+)通过LipofectamineTM2000转染试剂转染MDCK细胞,并经G418筛选获得阳性克隆.通过OAT1的经典底物6-羧基荧光素(6-carboxyfluorescein,6-CFL)在单克隆细胞内的积聚量以及中药单体存在时细胞内的积聚量来检测OAT1的活性.实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR)检测OAT1的mRNA的表达量.利用稳定细胞株,研究了6-CFL在MDCK-mock和MDCK-OAT1细胞中的摄取、中药单体对6-CFL摄取的抑制特性.结果 qRT-PCR结果表明,所建立的MDCK-OAT1细胞与mock细胞相比,OAT1 mRNA相对表达量为后者的4 862倍,摄取6-CFL的能力为后者的14.9倍.6-CFL在细胞株中摄取的Km值为42.36 μmol·L-1,部分中药单体能显著抑制MDCK-OAT1转运6-CFL的能力.结论 OAT1抑制剂筛选模型构建成功,并能快速有效地筛选出对OAT1有潜在抑制作用的中药单体,为后期的基于OAT1的植物-药物相互作用提供实验基础.

关键词：马丁达比狗肾上皮细胞、有机阴离子转运体1、6-羧基荧光素、摄取、中药单体

所属期刊栏目：52

分类号：R965(药理学)

资助基金：广东省科技计划2014A020210013

在线出版日期：2017-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：36-40