锌离子的心肌线粒体保护作用及其机制研究
目的 研究外源性锌(Zn2+)的心肌线粒体保护作用及其可能的细胞内信号转导机制.方法 大鼠心脏组织来源的H9c2细胞株的常规培养;随机分为对照组、ZnCl2组(1～20 μmol· L-1,孵育20 min)、ZnCl2+抑制剂组[PI3K抑制剂LY294002,10 μmol·L-1、线粒体ATP敏感性钾离子通道(mKATP)抑制剂5-羟基癸酸甘油酯(5-HD),0.5 mmol·L-1,孵育10 min后加入ZnCl2 20 min]、抑制剂组(孵育10 min);激光扫描共聚焦显微镜观察线粒体染料TMRE红色荧光强度的变化以确定线粒体膜电位(△ψm),600 μmol·L-1H2O2造成心肌细胞氧化损伤,进而了解线粒体通透性转移孔(mPTP)的开放程度;Western blot检测磷酸化糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和AKT/PKB(蛋白激酶B,protein kinase B)蛋白表达;模拟缺血/再灌注损伤,流式细胞仪检测细胞存活率;Fugene 6转染试剂盒进行激活型GSK-3β质粒(GSK-3β-S9A)转染,观察其对mPTP开放的影响.结果 与正常组相比,对照组H2O2处理细胞20 min使TMRE荧光强度明显减少,不同浓度Zn2+能够抑制H2O2引起的TMRE荧光强度的减少,其中以10 μmol· L-1最明显;Zn2+使磷酸化GSK-3β和AKT蛋白表达明显增多,此作用被LY294002所阻断,5-HD未改变此作用;与正常组相比,缺血/再灌注明显减少细胞存活率,Zn2+没有增加缺血期细胞存活率而明显增加再灌注期细胞存活率;Zn2+能够模拟mPTP抑制剂环孢素(1 μmol·L-1)阻止mPTP开放,此作用同样被LY294002所逆转,5-HD未改变此作用,Zn2+未能改变GSK-3β-S9A转染细胞的荧光强度.结论 Zn2+通过PI3 K/AKT通路使GSK-3β失活进而抑制mPTP的开放,发挥心肌线粒体保护作用,mKATP可能未参与此过程.
锌离子、心肌保护、线粒体、糖原合成酶激酶-3β、线粒体通透转移孔
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R965(药理学)
国家自然科学基金;河北省高等学校科学技术研究项目;河北省高等学校科学技术研究项目;河北省中医药局项目;河北省卫生厅科学研究项目;华北理工大学杰出青年基金
2016-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1472-1477
