曲古霉素A联合环巴胺对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响
目的 本实验旨在研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A (TSA)联合Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环巴胺(CYA)干预对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响并初步探讨其可能机制.方法 采用CCK8方法检测曲古霉素A、环巴胺作用24 h对PANC-1细胞50％抑制浓度(IC50).用Hochest 33258荧光染色观察曲古霉素A、环巴胺单独及联合处理PANC-1细胞24 h后凋亡;荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测Hedgehog信号通路关键分子及凋亡相关基因mRNA表达的变化;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、活化胱天蛋白酶-3,活化胱天蛋白酶-8,活化胱天蛋白酶-9)及Hedgehog通路关键分子蛋白(Gli1、Smo、Ptc-1)表达的改变;细胞免疫荧光标记法检测Gli1蛋白表达的变化.结果 Hochest 33258染色显示,曲古霉素A及环巴胺均可诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,24 h IC50分别为(0.51 ±0.07) μmol·L-1和(33.6±2.3)μmol·L-1,两者联合指数为0.835,具有低度协同作用.曲古霉素A及环巴胺干预后Bcl-2 mRNA表达下降,Bax mRNA表达上调,尤以联合组明显.曲古霉素A0.5μmol · L-干预可抑制Gli1 mRNA的表达,联合环巴胺20 μmol·L-后对Hedgehog通路的抑制效应进一步增强,降低Gli1、Smo mRNA表达量,上调Gli3 mRNA的表达.Western印迹结果显示,曲古霉素A0.5μmol· L-1、环巴胺20μmol·L-单独及联合处理PANC-1后,凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9活化程度进一步上升,凋亡抑制因子Bcl-2的表达明显下降,Hedgehog信号关键分子蛋白Gli1、Smo、Ptc-1表达均明显下降,以联合组最为明显.细胞免疫荧光结果也显示Gli1表达明显下降.结论 曲古霉素A、环巴胺可协同抑制Hh通路,诱导胰腺癌PANC-1细胞的凋亡.
胰腺癌、曲古霉素A、Hedgehog、细胞凋亡、环巴胺
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R965(药理学)
2014-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
971-977
