中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品的研制
目的 建立中国仓鼠卵巢细胞DNA残留量定量测定用国家标准品.方法 使用QIAGEN Genomic-tip 500/G以及基因组DNA纯化试剂制备了中国仓鼠卵巢细胞基因组DNA作为标准品原料,通过紫外分光光度法和电泳进行纯度和含量测定后分装,采用紫外分光光度法对我国第一批中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品进行协作标定,并评价其稳定性和适用性.结果 中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品经检测,A260/A2so均在1.7 ～1.9之间,电泳图谱只有单一条带,符合规定.该标准品经6家实验室协作标定共90次,几何平均含量为93.63 μg· mL-1,平均含量的95％可信区间为92.86 ～ 94.40 μg·mL-1,单次测定的95％参考值范围为86.51 ～ 100.89 μg·mL-1,平均可信限率为0.81％.加速热稳定实验表明,该标准品在-20、4、25、37℃条件下放置4个月,DNA含量无明显改变,但37℃条件下A260/A280有下降趋势；-20、4、25℃条件下电泳结果为单一条带,37℃条件下DNA有降解条带.-20 ℃贮存1年的长期稳定性结果显示,标准品DNA浓度及A260/A280无显著性差异,电泳条带单一,因此-20℃条件下长期保存标准品稳定性较好.在标准品适用性研究中,利用该标准品进行荧光染色法测定,标准曲线r值为0.999 0以上,在0.781～100ng·mL-1之间线性良好,各稀释度RSD均小于10％；利用该标准品进行定量PCR法测定,标准曲线r值为0.990 0以上,在10-2～103 pg之间线性良好,熔解曲线可见单一峰出现.结论 该批中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品用于荧光染色法和定量PCR检测中国仓鼠卵巢细胞DNA残留量,含量定为93.63 μg·mL-1,批号为270026-201101.
中国仓鼠卵巢细胞DNA、国家标准品、DNA残留量、荧光染色法、定量聚合酶链式反应法
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R917(药物基础科学)
国家"重大新药创制"科技重大专项2012ZX09304010;国家高技术研究发展计划863计划2012AA020805
2013-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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