HPLC 测定大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶活性及体外动力学研究

摘要：

目的 建立一种测定1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)高效液相色谱分析方法,并以1-氯-2,4-二硝基苯为探针测定大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性并进行体外动力学分析.方法 色谱条件:Welch Materials UltimateTM XB C18反相柱(4,6mm× 250 mm,5 μm),流动相:乙腈-水(7:3),流速0.8 mL·min-1,柱温30 ℃,检测波长238 nm.实验方法:1-氯-2,4-二硝基苯与大鼠肝微粒体在37℃温孵7 min后,冰乙腈终止反应.反应液离心取上清液过滤后进行HPLC分析,通过Sigma Plot软件作图求算Vmax、Km及代谢清除率(CLint)值.结果 1-氯-2,4-二硝基苯的Rt=6.0 min,峰形良好,且无内源性干扰.最低检测限为1.0 μmol·L-1,线性范围:2.5 ～100.0μmol·L-1.日内、日间精密度均小于10％.5d内于室温及- 20℃下较稳定.方法回收率为99.38％～108％.动力学分析表明,不同浓度1-氯-2,4-二硝基苯在0.02 mg·mL-1蛋白浓度下孵育7 min,测得动力学参数:Vmax为85.45 nmol·min-1·(mg protein)-1；Km为15.09 μmol·L-1；CLhet为5.66 mL·min-1·(mg protein)-1.结论 该方法稳定可靠,灵敏度高,能准确快速测定谷胱甘肽硫转移酶活性,可用于其体外动力学研究.

关键词：高效液相色谱法、1-氯-2、4-二硝基苯、大鼠肝微粒体、谷胱甘肽硫转移酶

所属期刊栏目：47

分类号：R969.1(药理学)

资助基金：重庆市自然科学基金资助项目CSTC.2009BA5083

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1065-1068