抗人表皮生长因子受体2人源化单克隆抗体在中国仓鼠卵巢细胞中的表达、纯化及活性测定
目的 筛选得到稳定表达重组人源化抗HER2单克隆抗体(rhHER2-mAb)的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)最优表达株,采用旋转振荡式培养及小规模放大,测定纯化后抗体蛋白的活性和亲和力.方法 使用一次性旋转振荡生物反应器——Tube-spin对细胞株进行高通量筛选,然后使用摇瓶进行规模放大培养,利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、HPLC检测产物的纯度,夹心ELISA检测产物的表达量,MTT检测产物的活性.结果 通过比较,确定产量最高的#38细胞克隆株,经过规模放大培养得到足量细胞上清液,摇瓶表达量达到( 152±20) mg·L-1.纯化后经检测目的蛋白的相对分子质量约为150×103,纯度在96％以上,与商品化的赫赛汀一致；活性检测和亲和力检测也显示其活性和亲和力与赫赛汀相当.结论 通过细胞株筛选得到高表达细胞株,经旋转振荡式放大培养,成功纯化获得抗体蛋白,与商品化药物性质一致,为大规模旋转振荡培养发酵奠定基础.
人源化抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体、中国仓鼠卵巢细胞、旋转振荡生物反应器、规模放大、活性检测、乳腺癌
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Q813(生物工程学(生物技术))
重大新药创制"科技重大专项;广州市生物产业化重大专项;暨南大学校内培育项目;广东省产学研项目
2012-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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