重组复制型溶瘤单纯疱疹病毒人细胞巨噬细胞集落刺激因子的质量研究
目的 研究建立重组复制型溶瘤单纯疱疹病毒人细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF,HSV1/GM-CSF)的质控方法与质量标准.方法 采用限制性内切酶酶切与PCR法,对GM-CSF基因、单纯疱疹病毒载体ICP 34.5,ICP6,ICP47等改造结构进行鉴定.采用A260紫外吸收法检测病毒颗粒数;pfu法测定HSV1/GM-CSF感染活性.HSV1/GM-CSF体外感染Vero细胞后,分别测定感染上清中GM-CSF表达量以及表达产物的生物学活性;测定HSV1/GM-CSF对肿瘤细胞MCF7的体外杀伤活性;HSV1/GM-CSF分别以相同MOI感染MCF7与二倍体人胚肺成纤维细胞MRCS后,分别测定细胞裂解上清中子代病毒的感染活性,并以子代病毒的感染活性比值来分析该制品在肿瘤细胞中的增殖复制能力.采用PCR法控制野生型单纯疱疹病毒等外源因子的残留.结果 对重组HSV1/GM-CSG基因组的酶切、以及对所携带的GM-CSF基因、ICP 34.5,ICP6,ICP47基因改造区的PCR鉴定结果与理论值相符.病毒载体颗粒数为4.5x1010VP·mL-1,感染活性为4.3×107 pfu·mL-1.HSV1/GM-CSF以MOI 0.0l感染Vero细胞72 h后,ELISA检测上清中GM-CSF表达量为228 ng·mL-1,表达产物的生物学活为4.3×103U·ML-1.该基因治疗制剂对人乳腺癌肿瘤细胞MCF7体外杀伤的MOIIC50为0.08.以相同MOI感染并经pfu法检测,HSV1/GM-CSF在人乳腺癌肿瘤细胞MCF7与人胚肺成纤维二倍体细胞MRC5的增殖比值为308.未检出野生型单纯疱疹病毒.其他各项指标均符合<人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则>及2005年版<中国药典>(三部)要求.结论 初步建立了HSV1/GM-CSF的质控方法和质量标准,并已用于该制品的质量控制.
重组单纯疱疹病毒载体、肿瘤溶瘤基因治疗、GM-CSF、质量控制
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R915;R927(药物基础科学)
2012-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1520-1525
